Maraming mga hindi kilalang bayani sa ating paligid, na tila ordinaryo lamang, ngunit sa katunayan ay tahimik silang malaki ang naiaambag sa atin. Ang Proteinase K ang "hindi kilalang bayani" sa industriya ng molecular diagnostics, bagama't kung ikukumpara sa "malaki at makapangyarihan" sa industriya, ang proteinase K ay napakasimple kaya matagal na nating nakaliligtaan ang kahalagahan nito. Dahil sa pagsiklab ng bagong epidemya ng korona, ang demand para sa proteinase K ay tumaas nang husto, at ang suplay sa loob at labas ng bansa ay malayong nahuhuli sa pagkonsumo, at biglang napagtanto ng lahat na napakahalaga ng proteinase K.
Ano ang gamit ng proteinase K?
Ang Proteinase K ay isang serine protease na may aktibidad na proteolytic enzyme at kayang mapanatili ang aktibidad sa malawak na hanay ng mga kapaligiran (pH (4-12.5), high-salt buffer, mataas na temperatura na 70°C, atbp.). Bukod pa rito, ang aktibidad ng proteinase K ay hindi napipigilan ng SDS, urea, EDTA, guanidine hydrochloride, guanidine isothiocyanate, atbp., at ang isang tiyak na dami ng detergent ay maaari ring mapahusay ang aktibidad ng proteinase K. Sa medikal na paggamot (virus at microbial disinfection), pagkain (pagpapalambot ng karne), katad (pagpapalambot ng buhok), paggawa ng alak (pagpapaliwanag ng alkohol), paghahanda ng amino acid (mga nabulok na balahibo), pagkuha ng nucleic acid, in situ hybridization, atbp., may mga aplikasyon ang proteinase K. Ang pinakakaraniwang ginagamit na aplikasyon ay ang pagkuha ng nucleic acid.
Kayang i-enzymolyze ng Proteinase K ang lahat ng uri ng protina sa sample, kabilang ang mga histone na mahigpit na nakagapos sa mga nucleic acid, upang ang mga nucleic acid ay mailabas mula sa sample at mailabas sa extract, na nagpapadali sa susunod na hakbang ng extraction at purification. Sa pagtuklas ng viral nucleic acid, ang proteinase K ay isa sa mga mahahalagang sangkap sa solusyon ng pagkuha ng sample ng virus. Kayang basagin at i-inactivate ng Proteinase K ang coat protein ng virus, na mas ligtas sa panahon ng transportasyon at pagtuklas; bukod pa rito, maaari ring sirain ng proteinase K ang RNase at pinipigilan ang pagkasira ng viral RNA at pinapadali ang pagtuklas ng nucleic acid.
Ang magdamag na katanyagan ng proteinase K
Sa larangan man ng siyentipikong pananaliksik o sa larangan ng IVD, ang pagkuha ng nucleic acid ang pinakasimpleng eksperimento, kaya ang proteinase K ay palaging isang napakahalagang pag-iral. Gayunpaman, noong nakaraan, ang proteinase K ay hindi gaanong kilala kaysa sa papel nito. Malaking bahagi nito ay dahil ang ugnayan ng supply at demand ng proteinase K ay napakatatag. Iilang tao lamang ang mag-iisip na ang supply ng proteinase K ay magiging isang problema.
Dahil sa pagsiklab ng bagong epidemya ng korona, tumaas ang demand para sa nucleic acid testing. Hanggang sa huling bahagi ng Hunyo 2020, halos 90 milyong bagong crown test na ang nakumpleto ng Tsina, at ang bilang na ito ay mas nakababahala pa sa pandaigdigang saklaw. Sa mga eksperimento sa nucleic acid extraction, ang working concentration ng proteinase K ay humigit-kumulang 50-200 μg/mL. Sa pangkalahatan, humigit-kumulang 100 μg ng proteinase K ang kinakailangan upang makakuha ng isang sample ng nucleic acid. Sa aktwal na paggamit, upang mapataas ang kahusayan ng nucleic acid extraction, kadalasan ay mas mataas ang Proteinase K na gagamitin. Ang nucleic acid detection ng bagong coronavirus ay nagdulot ng malaking demand sa proteinase K. Ang orihinal na balanse ng supply at demand ng proteinase K ay mabilis na nasira, at ang proteinase K ay naging isang mahalagang materyal sa pag-iwas sa epidemya sa magdamag.
Mga kahirapan sa produksyon ng proteinase K
Bagama't sa pag-unlad ng epidemya, ang mahalagang halaga ng proteinase K ay pinahahalagahan ng mga tao, nakakahiya na dahil sa labis na pagiging simple ng proteinase K, kakaunti lamang ang mga lokal na kumpanya na nasangkot sa produksyon ng proteinase K. Kapag nais ng mga tao na magtatag ng produksyon ng proteinase K. Sa proseso ng produksyon, natuklasan na ang proteinase K ay isang napaka-espesyal na protina. Lubhang mahirap palawakin ang kapasidad ng produksyon ng proteinase K sa maikling panahon.
Ang malawakang produksyon ng proteinase K ay nahaharap sa mga sumusunod na kahirapan
1. Mababang ekspresyon
Maaaring hindi partikular na sirain ng Proteinase K ang karamihan sa mga protina at magdulot ng malubhang toxicity sa expression host cell. Samakatuwid, ang antas ng ekspresyon ng proteinase K ay karaniwang napakababa. Ang screening ng mga expression system at strain na lubos na nagpapahayag ng proteinase K ay karaniwang nangangailangan ng mas mahabang cycle.
2. Mga nalalabi ng mga pigment at nucleic acid
Ang malawakang fermentasyon ay nagdudulot ng malaking dami ng pigment at mga residue ng host nucleic acid. Mahirap tanggalin ang mga duming ito sa pamamagitan ng isang simpleng proseso ng puripikasyon, at ang masalimuot na puripikasyon ay nagpapataas ng gastos at nagpapababa ng rate ng pagbawi.
3. Kawalang-tatag
Ang Proteinase K ay hindi sapat na matatag, maaari nitong i-enzymolyze ang sarili nito, at mahirap itong iimbak nang matatag sa 37°C sa loob ng mahabang panahon nang walang proteksiyon na ahente.
4. Madaling mamuo
Kapag inihahanda ang freeze-dried powder ng proteinase K, upang matiyak na malaki ang solidong nilalaman ng proteinase K sa freeze-dried powder, kinakailangang magdagdag ng freeze-dried protective agent sa mataas na konsentrasyon, ngunit kapag ang konsentrasyon ng proteinase K ay umabot sa 20mg/mL pataas, madali itong mabubuo bilang precipitate, na nagdudulot ng matinding kahirapan sa freeze-drying ng proteinase K na may mataas na solidong nilalaman.
5. Malaking pamumuhunan
Ang Proteinase K ay may malakas na aktibidad ng protease at kayang i-hydrolyze ang iba pang mga protease sa laboratoryo. Samakatuwid, ang proteinase K ay nangangailangan ng mga espesyal na lugar ng produksyon, kagamitan, at tauhan para sa pananaliksik, pagpapaunlad, at produksyon.
Solusyon ng proteinase K ng XD BIOCHEM
Ang XD BIOCHEM ay may mature na plataporma para sa pagpapahayag at paglilinis ng protina, at mayaman sa karanasan sa pagpapahayag at paglilinis ng mga recombinant na protina at pag-optimize ng mga proseso ng produksyon. Sa pamamagitan ng mabilis na pagbuo ng isang pangkat ng pananaliksik at pagpapaunlad, nalampasan ang malawakang proseso ng produksyon ng proteinase K. Ang buwanang output ng freeze-dried powder ay higit sa 30 KG. Ang produkto ay may matatag na pagganap, mataas na aktibidad na partikular sa enzyme, at walang host cytochrome at nucleic acid residues. Maligayang pagdating sa pakikipag-ugnayan sa XD BIOCHEM Kumuha ng trial package (E-mail:sales@xdbiochem.comTel: +86 513 81163739).
Kasama sa mga teknikal na solusyon ng XD BIOCHEM ang
Gamit ang multi-copy plasmid integration, ang mga high-expression strain na may expression level na 8g/L ay pinipili, na siyang nakakalutas sa problema ng mababang expression level ng proteinase K.
Sa pamamagitan ng pagtatatag ng isang proseso ng multi-step purification, ang host cytochrome at nucleic acid residues ng proteinase K ay matagumpay na naalis sa ibaba ng karaniwang halaga.
Sa pamamagitan ng high-throughput screening ng mga protective buffer formulation, isang buffer na matatag na kayang mag-imbak ng proteinase K sa 37°C ang napili.
Nalulutas ng mga screening buffer ang problema na ang proteinase K ay madaling maipon at mamuo sa mataas na konsentrasyon, at inilalatag ang pundasyon para sa freeze-drying na may mataas na solid content ng proteinase K.
Sampol ng XD BIOCHEM proteinase K
Pagsubok sa katatagan ng XD BIOCHEM proteinase K: walang magiging makabuluhang pagbabago sa aktibidad pagkatapos ng 80 araw sa temperatura ng silid
Pagsubok sa katatagan ng XD BIOCHEM proteinase K: walang magiging makabuluhang pagbabago sa aktibidad pagkatapos ng 80 araw sa temperatura ng silid.
Paghahambing ng epekto ng pagkuha ng nucleic acid ng XD BIOCHEM proteinase K at mga kakumpitensyang produkto. Sa proseso ng pagkuha ng nucleic acid, ginagamit ang XD BIOCHEM at competitive proteinase K ayon sa pagkakabanggit. Mas mataas ang kahusayan sa pagkuha ng XD BIOCHEM proteinase K at mas mababa ang Ct value ng target gene.
Oras ng pag-post: Disyembre 31, 2021