Maraming unsung heroes sa paligid natin, na parang ordinaryo lang, pero sa totoo lang ay tahimik silang nag-aambag sa atin.Ang Proteinase K ay ang "unsung hero" sa industriya ng molecular diagnostics, bagama't kumpara sa "malaki at makapangyarihan" sa industriya, ang proteinase K ay napakababa na matagal na nating napapansin ang kahalagahan nito.Sa pagsiklab ng bagong epidemya ng korona, ang demand para sa proteinase K ay tumaas, at ang supply sa loob at labas ng bansa ay malayo sa pagkonsumo, at ang lahat ay biglang natanto na ang proteinase K ay napakahalaga.
Ano ang gamit ng proteinase K?
Ang Proteinase K ay isang serine protease na may aktibidad na proteolytic enzyme at maaaring mapanatili ang aktibidad sa isang malawak na hanay ng mga kapaligiran (pH (4-12.5), high-salt buffer, mataas na temperatura na 70°C, atbp.).Bilang karagdagan, ang aktibidad ng proteinase K ay hindi inhibited ng SDS, urea, EDTA, guanidine hydrochloride, guanidine isothiocyanate, atbp., at ang isang tiyak na halaga ng detergent ay maaari ring mapahusay ang aktibidad ng proteinase K. Sa medikal na paggamot (virus at microbial disinfection ), pagkain (meat tenderization), leather (hair softening), winemaking (alcohol clarification), amino acid preparation (degraded feathers), nucleic acid extraction, in situ hybridization, atbp., proteinase K May mga application.Ang pinakakaraniwang ginagamit na aplikasyon ay ang pagkuha ng nucleic acid.
Maaaring i-enzymolyze ng Proteinase K ang lahat ng uri ng mga protina sa sample, kabilang ang mga histone na mahigpit na nakagapos sa mga nucleic acid, upang mailabas ang mga nucleic acid mula sa sample at mailabas sa extract, na nagpapadali sa susunod na hakbang ng pagkuha at paglilinis.Sa pagtuklas ng viral nucleic acid, ang proteinase K ay isa sa mga mahalagang sangkap sa solusyon sa sampling ng virus.Ang Proteinase K ay maaaring pumutok at hindi aktibo ang coat protein ng virus, na mas ligtas sa panahon ng transportasyon at yugto ng pagtuklas;bilang karagdagan, ang proteinase K ay maaari ding magpababa ng RNase na pinipigilan ang pagkasira ng viral RNA at pinapadali ang pagtuklas ng nucleic acid.
Ang magdamag na katanyagan ng proteinase K
Sa larangan man ng siyentipikong pananaliksik o sa larangan ng IVD, ang pagkuha ng nucleic acid ay ang pinakapangunahing eksperimento, kaya ang proteinase K ay palaging isang napakahalagang pag-iral.Gayunpaman, sa nakaraan, ang proteinase K ay hindi gaanong kilala kaysa sa papel nito.Ang isang malaking bahagi nito ay dahil ang relasyon ng supply at demand ng proteinase K ay napaka-stable.Ilang tao ang mag-iisip na ang supply ng proteinase K ay magiging problema.
Sa pagsiklab ng bagong epidemya ng korona, ang pangangailangan para sa pagsubok ng nucleic acid ay tumaas.Noong huling bahagi ng Hunyo 2020, natapos na ng China ang halos 90 milyong mga bagong pagsubok sa korona, at ang bilang na ito ay mas nakakaalarma sa pandaigdigang saklaw.Sa mga eksperimento sa pagkuha ng nucleic acid, ang gumaganang konsentrasyon ng proteinase K ay humigit-kumulang 50-200 μg/mL.Sa pangkalahatan, nangangailangan ng humigit-kumulang 100 μg ng proteinase K upang kunin ang isang sample ng nucleic acid.Sa aktwal na paggamit, upang mapataas ang kahusayan ng pagkuha ng nucleic acid, kadalasan ang Proteinase K ay gagamitin sa mas mataas na halaga.Ang pagtuklas ng nucleic acid ng bagong coronavirus ay nagdala ng malaking halaga ng pangangailangan ng proteinase K.Ang orihinal na balanse ng supply at demand ng proteinase K ay mabilis na nasira, at ang proteinase K ay naging isang mahalagang materyal sa pag-iwas sa epidemya sa magdamag.
Mga paghihirap sa paggawa ng proteinase K
Bagaman sa pag-unlad ng epidemya, ang mahalagang halaga ng proteinase K ay pinahahalagahan ng mga tao, nakakahiya na dahil sa labis na mababang-key ng proteinase K, ilang mga domestic na kumpanya ang nasangkot sa paggawa ng proteinase K. Kapag ang mga tao nais magtatag ng produksyon ng proteinase K Sa panahon ng proseso ng produksyon, natuklasan na ang proteinase K ay isang napakaespesyal na protina.Napakahirap na palawakin ang kapasidad ng produksyon ng proteinase K sa maikling panahon.
Ang malakihang produksyon ng proteinase K ay nahaharap sa mga sumusunod na paghihirap
1. Mababang ekspresyon
Ang Proteinase K ay maaaring hindi partikular na magpapahina sa karamihan ng mga protina at maging sanhi ng malubhang toxicity sa expression ng host cell.Samakatuwid, ang antas ng expression ng proteinase K sa pangkalahatan ay napakababa.Ang screening ng mga expression system at strain na lubos na nagpapahayag ng proteinase K sa pangkalahatan ay nangangailangan ng mas mahabang cycle.
2. Nalalabi ng mga pigment at nucleic acid
Ang malakihang fermentation ay nagpapakilala ng malaking halaga ng pigment at host nucleic acid residues.Mahirap tanggalin ang mga impurities na ito gamit ang simpleng proseso ng purification, at pinapataas ng kumplikadong purification ang gastos at binabawasan ang recovery rate.
3. Kawalang-tatag
Ang Proteinase K ay hindi sapat na matatag, maaari nitong i-enzymolyze ang sarili nito, at mahirap itong iimbak nang matatag sa 37°C sa loob ng mahabang panahon nang walang proteksiyon na ahente.
4. Madaling mamuo
Kapag inihahanda ang freeze-dried powder ng proteinase K, upang matiyak na ang solidong nilalaman ng proteinase K sa freeze-dried powder ay malaki, kinakailangan upang magdagdag ng isang freeze-dried protective agent sa isang mataas na konsentrasyon, ngunit kapag ang Ang konsentrasyon ng proteinase K ay umabot sa 20mg/mL at mas mataas, ito ay madali Ang pagsasama-sama ay bumubuo ng isang namuo, na nagdudulot ng malaking kahirapan sa freeze-drying ng proteinase K na may mataas na solidong nilalaman.
5. Malaking puhunan
Ang Proteinase K ay may malakas na aktibidad ng protease at maaaring mag-hydrolyze ng iba pang mga protease sa laboratoryo.Samakatuwid, ang proteinase K ay nangangailangan ng mga espesyal na lugar ng produksyon, kagamitan, at tauhan para sa pananaliksik at pagpapaunlad at produksyon.
XD solusyon ng proteinase K ng BIOCHEM
Ang XD BIOCHEM ay may mature na pagpapahayag ng protina at platform ng paglilinis, at may maraming karanasan sa pagpapahayag at paglilinis ng mga recombinant na protina at pag-optimize ng mga proseso ng produksyon.Sa pamamagitan ng mabilis na pagbuo ng isang research and development team, ang malakihang proseso ng produksyon ng proteinase K ay nalampasan.Ang buwanang output ng freeze-dried powder ay higit sa 30 KG.Ang produkto ay may matatag na pagganap, mataas na aktibidad na partikular sa enzyme, at walang host cytochrome at nucleic acid residues.Maligayang pagdating sa pakikipag-ugnayan sa XD BIOCHEM Kumuha ng trial package (E-mail:sales@xdbiochem.comTel: +86 513 81163739).
Kasama sa mga teknikal na solusyon ng XD BIOCHEM
Gamit ang multi-copy plasmid integration, ang mga high-expression na strain na may antas ng expression na 8g/L ay pinili, na nagtagumpay sa problema ng mababang antas ng expression ng proteinase K.
Sa pamamagitan ng pagtatatag ng isang multi-step na proseso ng paglilinis, ang host cytochrome at nucleic acid residues ng proteinase K ay matagumpay na naalis sa ibaba ng karaniwang halaga.
Sa pamamagitan ng high-throughput na screening ng mga pormulasyon ng proteksiyon na buffer, napili ang isang buffer na maaaring matatag na mag-imbak ng proteinase K sa 37°C.
Ang mga screening buffer ay nagtagumpay sa problema na ang proteinase K ay madaling pagsama-samahin at namuo sa matataas na konsentrasyon, at inilalagay ang pundasyon para sa mataas na solidong content ng protinaase K na freeze-drying.
XD BIOCHEM proteinase K sample
XD BIOCHEM proteinase K stability test: walang makabuluhang pagbabago sa aktibidad pagkatapos ng 80 d sa room temperature
XD BIOCHEM proteinase K stability test: walang makabuluhang pagbabago sa aktibidad pagkatapos ng 80 d sa room temperature.
Paghahambing ng epekto ng pagkuha ng nucleic acid ng XD BIOCHEM proteinase K at mga produktong nakikipagkumpitensya.Sa proseso ng pagkuha ng nucleic acid, XD BIOCHEM at mapagkumpitensyang proteinase K ay ginagamit ayon sa pagkakabanggit.Ang kahusayan sa pagkuha ng XD BIOCHEM proteinase K ay mas mataas at ang Ct value ng target na gene ay mas mababa.
Oras ng post: Dis-31-2021