Ang Dithiothreitol (DTT) ay isang karaniwang ginagamit na ahente ng pagbabawas, na kilala rin bilang bagong berdeng additive.Ito ay isang maliit na molekular na organic compound na may dalawang pangkat ng mercaptan (-SH).Dahil sa pagbabawas ng mga katangian at katatagan nito, ang DTT ay malawakang ginagamit sa biochemistry at molecular biology na mga eksperimento.
Ang pangunahing papel ng DTT ay upang bawasan ang disulfide bond sa mga protina at iba pang biomolecules.Ang disulfide bond ay isang mahalagang bahagi ng pagtitiklop at katatagan ng protina, ngunit sa ilalim ng ilang partikular na eksperimentong kundisyon, tulad ng nababawas na pagsusuri ng SDS-PAGE, recombination ng protina at pagtitiklop, kinakailangan na bawasan ang disulfide bond sa dalawang grupo ng thiol upang malutas ang spatial na istraktura ng ang protina.Maaaring mag-react ang DTT sa mga disulfide bond upang bawasan ang mga ito sa mga grupong mercaptan, kaya nagbubukas ng spatial na istraktura ng protina at ginagawa itong madaling pag-aralan at manipulahin.
Maaari ding gamitin ang DTT upang protektahan ang aktibidad at katatagan ng enzyme.Sa ilang enzyme-catalyzed reactions, ang aktibidad ng enzyme ay maaaring bawasan ng oxidant.Ang DTT ay maaaring tumugon sa mga oxidant upang bawasan ang mga ito sa mga hindi nakakapinsalang sangkap, sa gayon ay pinoprotektahan ang aktibidad at katatagan ng enzyme.
Kung ikukumpara sa mga tradisyunal na ahente ng pagbabawas tulad ng β-mercaptoethanol (β-ME), ang DTT ay itinuturing na isang mas ligtas at mas matatag na ahente ng pagbabawas.Ito ay hindi lamang matatag sa may tubig na solusyon, ngunit pinapanatili din nito ang pagbabawas ng mga katangian sa ilalim ng mataas na temperatura at mga kondisyon ng acid-base.
Ang paggamit ng DTT ay medyo simple.Sa pangkalahatan, ang DTT ay natunaw sa isang naaangkop na buffer at pagkatapos ay idinagdag sa eksperimentong sistema.Ang pinakamainam na konsentrasyon ng DTT ay kailangang matukoy ayon sa partikular na eksperimento, at karaniwang ginagamit sa hanay na 0.1-1mM.Ang mas mababang mga konsentrasyon ay maaaring mabawasan ang masamang epekto sa paglaki ng cell at maaaring mabawasan ang cytotoxicity dahil sa sobrang pagpapahayag ng mga target na protina.Ang mas mataas na konsentrasyon ay maaaring magdulot ng labis na pagkarga ng cell metabolic, na nakakaapekto sa paglaki ng cell at kahusayan sa pagpapahayag.
Ang paraan upang matukoy ang pinakamainam na konsentrasyon ay maaaring suriin ang antas ng pagpapahayag ng target na protina sa pamamagitan ng pagsasagawa ng mga pagsubok sa induction ng IPTG sa iba't ibang mga konsentrasyon.Maaaring isagawa ang maliliit na pagsusuri sa kultura gamit ang isang hanay ng mga konsentrasyon ng IPTG (hal. 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, atbp.) at ang epekto ng pagpapahayag sa iba't ibang konsentrasyon ay maaaring masuri sa pamamagitan ng pagtukoy sa antas ng ekspresyon ng target na protina (hal. Western blot o fluorescence detection).Ayon sa mga eksperimentong resulta, ang konsentrasyon na may pinakamahusay na epekto ng pagpapahayag ay napili bilang pinakamainam na konsentrasyon.
Bilang karagdagan, maaari ka ring sumangguni sa nauugnay na literatura o karanasan ng iba pang mga laboratoryo upang maunawaan ang karaniwang ginagamit na hanay ng konsentrasyon ng IPTG sa ilalim ng mga katulad na pang-eksperimentong kondisyon, at pagkatapos ay i-optimize at ayusin ayon sa mga pang-eksperimentong pangangailangan.
Mahalagang tandaan na ang pinakamainam na konsentrasyon ay maaaring mag-iba depende sa iba't ibang mga expression system, target na protina, at pang-eksperimentong kundisyon, kaya pinakamahusay na mag-optimize sa isang case-by-case na batayan.
Sa buod, ang DTT ay isang karaniwang ginagamit na ahente ng pagbabawas na maaaring magamit upang bawasan ang mga bono ng disulfide sa mga protina at iba pang biomolecules at upang protektahan ang aktibidad at katatagan ng enzyme.Ito ay malawakang ginagamit sa biochemistry at molecular biology na mga eksperimento.
Oras ng post: Set-28-2023