4-Nitrophenyl beta-D-galactopyranoside CAS:200422-18-0

Epekto: Ang ONPG ay isang substrate na partikular na ginagamit upang matukoy ang presensya at aktibidad ng enzyme na β-galactosidase. Kapag ang enzyme na β-galactosidase ay naroroon at aktibo, hinahati nito ang ONPG sa dalawang produkto: o-nitrophenol at isang galactose derivative. Ang paglabas ng o-nitrophenol ay nagreresulta sa pagbabago ng kulay ng dilaw, na maaaring masukat gamit ang isang spectrophotometer.

Aplikasyon: Ang ONPG ay may ilang aplikasyon sa pananaliksik sa molekular na biyolohiya at biokemistri:

Pagtukoy sa aktibidad ng β-galactosidase: Karaniwang ginagamit ang ONPG upang sukatin at bilangin ang aktibidad ng enzyme na β-galactosidase. Ang bilis ng pagbuo ng o-nitrophenol, na direktang proporsyonal sa aktibidad ng enzyme, ay maaaring masukat sa pamamagitan ng spectrophotometric na pamamaraan.

Ekspresyon at regulasyon ng gene: Ang ONPG ay kadalasang ginagamit sa mga eksperimentong may kaugnayan sa mga pag-aaral ng ekspresyon at regulasyon ng gene. Madalas itong ginagamit sa mga fusion protein assay, tulad ng karaniwang ginagamit na lacZ fusion system, upang pag-aralan ang ekspresyon ng mga gene sa ilalim ng kontrol ng mga partikular na promoter. Ang aktibidad ng beta-galactosidase na sinusukat gamit ang ONPG ay nagbibigay ng mga pananaw sa antas ng ekspresyon ng gene.

Pagsusuri para sa aktibidad ng β-galactosidase: Ang ONPG ay maaaring gamitin bilang isang colorimetric screening method sa recombinant DNA technology upang matukoy ang presensya at functionality ng LacZ gene, na nagko-code ng β-galactosidase. Ang screening method na ito ay nakakatulong sa pagtukoy ng mga clone na naglalaman ng gene na pinag-aaralan.

Mga pag-aaral sa kinetika ng enzyme: Ang ONPG ay kapaki-pakinabang din sa pag-aaral ng kinetika ng β-galactosidase enzyme. Sa pamamagitan ng pagsukat ng bilis ng reaksyon ng enzyme-substrate sa iba't ibang konsentrasyon ng substrate, posibleng matukoy ang mga kinetikong parameter tulad ng mga Michaelis-Menten constant (Km) at pinakamataas na bilis ng reaksyon (Vmax).