Paano matukoy ang pinakamainam na konsentrasyon?
Para sa inducer IPTG (isopropyl-beta-d-thiogalactoside), mas mataas ang konsentrasyon, mas mabuti.Ang pinakamainam na konsentrasyon ay nakasalalay sa mga partikular na pang-eksperimentong kondisyon at ang nais na epekto ng induction.
Sa pangkalahatan, ang konsentrasyon ng IPTG ay ginagamit sa hanay na 0.1-1 mM.Ang mas mababang mga konsentrasyon ay maaaring mabawasan ang masamang epekto sa paglaki ng cell at maaaring mabawasan ang cytotoxicity dahil sa sobrang pagpapahayag ng mga target na protina.Ang mas mataas na konsentrasyon ay maaaring magdulot ng labis na pagkarga ng cell metabolic, na nakakaapekto sa paglaki ng cell at kahusayan sa pagpapahayag.
Ang paraan upang matukoy ang pinakamainam na konsentrasyon ay maaaring suriin ang antas ng pagpapahayag ng target na protina sa pamamagitan ng pagsasagawa ng mga pagsubok sa induction ng IPTG sa iba't ibang mga konsentrasyon.Maaaring isagawa ang maliliit na pagsusuri sa kultura gamit ang isang hanay ng mga konsentrasyon ng IPTG (hal. 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, atbp.) at ang epekto ng pagpapahayag sa iba't ibang konsentrasyon ay maaaring masuri sa pamamagitan ng pagtukoy sa antas ng ekspresyon ng target na protina (hal. Western blot o fluorescence detection).Ayon sa mga eksperimentong resulta, ang konsentrasyon na may pinakamahusay na epekto ng pagpapahayag ay napili bilang pinakamainam na konsentrasyon.
Bilang karagdagan, maaari ka ring sumangguni sa nauugnay na literatura o karanasan ng iba pang mga laboratoryo upang maunawaan ang karaniwang ginagamit na hanay ng konsentrasyon ng IPTG sa ilalim ng mga katulad na pang-eksperimentong kondisyon, at pagkatapos ay i-optimize at ayusin ayon sa mga pang-eksperimentong pangangailangan.
Mahalagang tandaan na ang pinakamainam na konsentrasyon ay maaaring mag-iba depende sa iba't ibang mga expression system, target na protina, at pang-eksperimentong kundisyon, kaya pinakamahusay na mag-optimize sa isang case-by-case na batayan.
Oras ng post: Set-28-2023